過(guò)氧化氫酶（Catalase，CAT）試劑盒（鉬酸銨比色法）說(shuō)明書

分光光度法 50 管/48樣

過(guò)氧化氫酶試劑盒 鉬酸銨比色法 抗逆

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的H2O2 清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。

測(cè)定原理：

組成：

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405 nm。

2、在EP 管中加入下列試劑

CAT 活性計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.18x + 0.0013       R2 = 1          x：體系中過(guò)氧化氫濃度變化值（μmol/ml）

y：吸光值差值ΔA

2、血清（漿）CAT 活力的計(jì)算:

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化 1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(μmol /min/ml)= =(ΔA-0.0013)÷0.18×V 反總÷V 樣÷T

=222.22×(ΔA-0.0013)

3、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 CAT 活力計(jì)算：

（1）   按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化 1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0013)÷0.18×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=222.22×(ΔA-0.0013)÷Cpr

（2）   按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g 組織每分鐘催化 1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0013)÷0.18×V÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T=222.22×(ΔA-0.0013)÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.2 ml；V 樣：加入樣本體積，0.015 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml。

注意事項(xiàng)：

1、預(yù)實(shí)驗(yàn)若發(fā)現(xiàn)酶活性過(guò)高（A 測(cè)定＜0.1），可用提取液適當(dāng)稀釋樣品后測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

2、若 A 空白＜A 測(cè)定，一方面可能是酶活性過(guò)低，可將反應(yīng)時(shí)間 2 延長(zhǎng)到 5min,另一方面可能樣本中雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，可將樣本稀釋 5 倍左右后測(cè)定，并在計(jì)算公式中代入實(shí)際反應(yīng)時(shí)間和乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

過(guò)氧化氫酶試劑盒 鉬酸銨比色法 抗逆