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產(chǎn)品分類
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| 品牌 | NobleRyder/諾博萊德 | 貨號 | RET04 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50rxns / 100rxns | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 主要用途 | 可高效去除RNA中的基因組DNA污染。 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
諾博萊德 cDNA合成
cDNA合成 反轉(zhuǎn)錄
產(chǎn)品名稱：cDNA合成
產(chǎn)品內(nèi)容：
| 組分 | RET04-50 | RET04-100 |
| 4× Master SuperMix 5×gDNA Eraser Mix RNase-free Water | 250 μL 100 μL 1 mL | 500 μL 2×100 μL 2×1 mL |
產(chǎn)品簡介:
NobleRyder® First Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR（with dsDNase）是一款含有基因組去除組分的第一鏈cDNA合成試劑盒，可高效去除RNA中的基因組DNA污染。4× Master SuperMix 中包含第一鏈cDNA合成所需的所有組分，使用時(shí)僅需加入RNA模板和水即可進(jìn)行合成，使用本試劑盒獲得的cDNA可用于qPCR、普通PCR等實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng):
1. 請于使用前確保產(chǎn)品wan全解凍，che底混勻后短暫離心，置于冰上備用。
2. 為避免樣品間交叉污染和氣溶膠污染，推薦在超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行反應(yīng)體系的配制,并使用帶濾芯的吸頭。
3. 反復(fù)凍融會影響產(chǎn)品的性能。
4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
實(shí)驗(yàn)流程:
基因組DNA去除
| 試劑 | 體積 |
| 5× gDNA Eraser Mix | 2 μL |
| Total RNA | ＜1 μg |
| RNase-free Water | up to 10 μL |
用移液器輕輕吹打混勻，37℃反應(yīng)2min，立即置于冰上，或者繼續(xù)55℃反應(yīng)5min后置于冰上。（55℃反應(yīng)5min能充分失活dsDNase，后續(xù)加入的4× Master SuperMix中含有DTT也能抑制dsDNase的活性）
配置第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系
試劑配置
| 試劑 | 體積 |
| 4× Master SuperMix | 5 μL |
| Total RNA | Up to 1 μg |
| RNase-free Water | Up to 20 μL |
2 輕柔吸打混勻。
3反應(yīng)程序設(shè)置
| 溫度 | 時(shí)間 |
| 25℃ 50℃* 85℃ | 5 min 15~45 min 5 min |
*如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域，可將反應(yīng)溫度提高到55℃，有助于提高產(chǎn)量。
4 該產(chǎn)物可直接用于第二鏈的合成或qPCR擴(kuò)增反應(yīng)，請?jiān)?20℃保存產(chǎn)物。
cDNA合成 反轉(zhuǎn)錄
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