動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總RNA快速提取試劑盒 

FlashPure Tissue/Cell/Insect Total RNA Mini Kit動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總 RNA 提取試劑盒 

目錄號(hào)：91017

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個(gè)月，不影響使用效果。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

適用于快速提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞、昆蟲的總RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測序、RACE等。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 無毒：免氯仿、免β-巰基乙醇！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全過程僅需 20min！

操作步驟

提示：

第一次使用前，請先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量無水乙醇。

所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行。

1. 動(dòng)物組織、昆蟲

a. 電動(dòng)勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 350 μl 的裂解液 ARL，電動(dòng)勻漿，直到無明顯組織塊即可。

b. 液氮研磨：轉(zhuǎn)移 350 μl 裂解液 ARL 至 1.5 ml 離心管中。液氮研磨組織成細(xì)粉，取 10~20 mg 組織細(xì)粉轉(zhuǎn)入裝有裂解液的 1.5ml 離心管中，劇烈渦旋振蕩，充分裂解。

( 注意：裂解 20-30 mg 動(dòng)物組織，需要加入 600μl 裂解液 ARL )

c. 將勻漿后裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中。

d. 下接步驟 3。

2. 細(xì)胞

a. 懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，加350μl裂解液ARL（<5x106 細(xì)胞）或600μl裂解液ARL（5x106-1x107 細(xì)胞），吹打混勻，劇烈渦旋振蕩，充分混勻，裂解細(xì)胞。

b. 貼壁細(xì)胞：不需要消化，徹di吸干培養(yǎng)液后，直接加裂解液 ARL，反復(fù)吹打細(xì)胞，幫助裂解；細(xì)胞培養(yǎng)瓶要先用胰蛋bai酶消化后離心收集細(xì)胞，然后加入裂解液 ARL，吹打混勻，劇烈渦旋振蕩 20 sec，充分裂解。

（< 5x106細(xì)胞加 350 μl裂解液 ARL ；5x106-1x107細(xì)胞加 600 μl 裂解液 ARL）

（一般情況下，24 孔板、6 孔板、直徑 3.5cm 的培養(yǎng)皿，每孔加 350 μl

裂解液 ARL，直徑 6cm 以上的培養(yǎng)容器加 600 μl 裂解液 ARL）

c. 下接步驟 3。

3. 向上清或者裂解物中加入等體積（通常為 350 μl / 600 μl）的 70%乙醇，

吹打混勻。

4. 每次轉(zhuǎn)移≤700 μl 混合物至一個(gè) RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），

13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液，此時(shí) RNA 被吸附在膜上。重復(fù)此

過程，直到溶液全部上柱。

5. 加入700μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 30 sec，

倒棄濾液。

6.加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。

7. 重復(fù)步驟 6。

8. 將 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上乙醇。

9. 取出RNA吸附柱，放入一個(gè)新的 1.5 ml RNase - free 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加30~50 μl RNase free H2O（事先在70-90℃水浴中加熱可提高產(chǎn)量），室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

10.提取的RNA可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。

相關(guān)產(chǎn)品： 

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

附錄：

一、免液氮直接研磨（自動(dòng)研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在2.0 ml液氮研磨管中加入4 mm兩粒，加600μl裂解液ARL，放進(jìn)20mg 左右的樣本，設(shè)置65個(gè)頻率，震蕩2min。

b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。

二、液氮研磨（自動(dòng)研磨儀）:

a. 把研磨模塊丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢。

b. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3mm 鋼珠 3 粒，放進(jìn) 20-30mg 樣本，

投入液氮中預(yù)冷。

c. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中，放進(jìn)研磨儀，設(shè)置 55 個(gè)頻率，

震蕩 30~60 sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）

d. 研磨完成后，馬上加 600 μl 裂解液 ARL，劇烈渦旋振蕩,充分混勻。

e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。

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