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| 品牌 | NobleRyder/諾博萊德 | 貨號(hào) | 91451 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50次 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 主要用途 | 用于快速提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞的總 RNA | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
諾博萊德 高效動(dòng)物組織/細(xì)胞總RNA提取試劑盒
高效動(dòng)物組織/細(xì)胞總 RNA 提取試劑盒FlashPure Plus Tissue/Cell Total RNA Mini Kit
目錄號(hào)：91451
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 91451-50（50 次） |
裂解液 ACL Plus | 30 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
DNA 清除/RNA 吸附通用柱 | 100 套 |
RNase-Free 1.5 ml 離心管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙醇
保存條件
室溫（15 ~ 25℃），有效期 12 個(gè)月。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
適用于快速提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞的總 RNA，采用 gDNA 過濾器，高效濾除gDNA，不需要繁瑣的DNase I消化過程，提取的RNA，可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE、芯片等。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 無毒：免氯仿、免β-巰基乙醇！
2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
3. 高效：提取全過程僅需 10 min！
重要提示：
① 第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液 RW 中加入無水乙醇，詳見瓶身標(biāo)簽。
② 所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。
③ 肝臟、脾臟、腎臟、胰腺、心臟的樣本投入量不要超過 10 mg。
操作步驟：
1. 動(dòng)物組織：
a．電動(dòng)勻漿：取新鮮組織 10~25 mg，加入 500μl 裂解液 ACL Plus，電動(dòng)勻漿，直到無明顯組織塊即可。
b．液氮研磨：在液氮中研磨組織成細(xì)粉，取 10~25 mg 組織細(xì)粉加入500μl裂解液 ACL Plus，劇烈渦旋振蕩 20 sec，充分裂解。
c． 將勻漿后裂解物 13，000 rpm 離心 3 min。
d．下接步驟 3。
2. 細(xì)胞
a．懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，加入500 μl裂解液 ACL Plus（<7x106 細(xì)胞），吹打混勻，劇烈渦旋振蕩 20 sec，充分裂解。
b．貼壁細(xì)胞：吸棄細(xì)胞培養(yǎng)基，可以直接在培養(yǎng)皿中加裂解液 ACL Plus進(jìn)行消化、裂解；或先用yi酶消化后離心收集細(xì)胞，再加入裂解液，每<7x106細(xì)胞加入 500 μl 裂解液 ACL Plus，吹打混勻，渦旋振蕩至無明顯細(xì)胞團(tuán)，使其充分裂解。
貼壁細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)量表：
培養(yǎng)器皿 24 孔培養(yǎng)板 6 孔培養(yǎng)板 | 面積（cm2） 2 9.6 | 培養(yǎng)液量（ml）1.0 2.5 | 細(xì)胞數(shù)量 5×105 2.5×106 |
3.5cm 培養(yǎng)皿 | 8 | 3.0 | 2×106 |
6cm 培養(yǎng)皿 25cm 培養(yǎng)瓶 100cm 玻璃培養(yǎng)瓶 | 21 25 33 | 5.0 5.0 10 | 5.2×106 5×106 7 x 106 |
3. 將裂解物上清或者裂解物全部加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中（以下簡(jiǎn)稱通用柱），13,000 rpm 離心 1 min，丟棄通用柱的內(nèi)管，
保留濾液（RNA 在濾液中）。
4. 向?yàn)V液中加入0.5倍體積（通常為 250 μl）的無水乙醇，吹打混勻。
5. 將濾液混合物全部加入一個(gè)通用柱中，13,000 rpm 離心1 min，倒棄
濾液。此時(shí)，RNA被吸附在膜上。
6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室溫放置1min,13,000 rpm 離心 30 sec，
倒棄濾液。
7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。
8. 重復(fù)步驟 7。
9. 把通用柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，徹di除去膜上殘留
的乙醇。
10. 取出通用柱，放入新的 RNase-free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央
懸空滴加 30-50μl RNase-Free H2O（事先在 70-90℃水浴中加熱可提
高產(chǎn)量），室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。
11. 得到的 RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。
附錄：
一、免液氮直接研磨（自動(dòng)研磨儀）——適用于新鮮樣本
a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入 4 mm 兩粒，加 500 μl 裂解液 ACL
plus，放進(jìn) 20 mg 左右的樣本，設(shè)置 65 個(gè)頻率，震蕩 2 min。
b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
二、液氮研磨（自動(dòng)研磨儀）:
a. 把研磨模塊丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢。
b. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3mm 鋼珠 3 粒，放進(jìn) 20-30mg 樣本，
投入液氮中預(yù)冷。
c. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中，放進(jìn)研磨儀，設(shè)置 55 個(gè)頻率，
震蕩 30~60 sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）
d. 研磨完成后，馬上加 500 μl 裂解液 ACL Plus，劇烈渦旋振蕩,充分
混勻。
e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
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