諾博萊德 PAX Blood microRNA Kit 核酸提取

PAX Blood miRNA Kit (For PAXgene Blood RNA Tube) 

目錄號：91511

產(chǎn)品簡介

PAX Blood miRNA Kit設(shè)計用于從儲存在保存試劑和PAXgene®中的血液樣品中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應(yīng)用。

從保存試劑中取出樣品。對于儲存在 PAXgene 中的血液樣本®血液 RNA 管，通過離心收集細胞。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒。用異丙醇調(diào)整結(jié)合條件后，將樣品上樣到 RNA 結(jié)合柱上。通過短暫的離心或真空步驟，樣品通過結(jié)合 RNA/miRNA 的柱基質(zhì)。經(jīng)過三個洗滌步驟后，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品特點

配套PAXgene采血/RNA保存管提取血液microRNA

Kit Contents and Storage

注意：蛋白酶 K 是一種凍干物。離心幾秒鐘，然后用 1 ml 蒸餾水等分溶液復(fù)溶。在 –20 °C 下儲存。 避免反復(fù)凍融。所有試劑在指ding溫度下儲存時，可穩(wěn)定保存 9 個月。

描述
PAX Blood miRNA Kit設(shè)計用于從儲存在保存試劑和PAXgene® Blood RNA Tube中的血液樣本中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應(yīng)用。

從保存試劑中取出樣品。對于儲存在 PAXgene® Blood RNA Tubes 中的血液樣本，通過離心收集細胞。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒。用異丙醇調(diào)整結(jié)合條件后，將樣品上樣到 RNA 結(jié)合柱上。通過短暫的離心或真空步驟，樣品通過結(jié)合 RNA/miRNA 的柱基質(zhì)。經(jīng)過三個洗滌步驟后，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA。

用戶提供的材料和設(shè)備：

1. 微量離心機的離心能力為 13,000 x g

2. 100% 異丙醇

3. 不含 RNase 的過濾移液器吸頭

4. 不含 RNase 的水

5. 1.5 或 2.0 ml 微量離心管

6. 搖動培養(yǎng)箱或加熱塊，溫度可達 55°C、65°C

7. 帶水平轉(zhuǎn)子的離心機，離心力可達 5,500 x g

注意：
     shou次使用前，將規(guī)定量的乙醇加入洗滌液中

溶液 1 和洗滌溶液 2/3 瓶，充分混合，并用勾號標記瓶子。

將培養(yǎng)箱或加熱塊加熱至 55°C。

1. 使用水平轉(zhuǎn)子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA 管 10 分鐘。

2. 吸出并丟棄上清液。
     3. 加入 4 mL 不含 RNase 的水。渦旋以wan全重懸沉淀。
     4. 使用水平轉(zhuǎn)子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA Tube 10 分鐘。
     5. 吸出并丟棄上清液。

注意：不wan全去除上清液會降低裂解效率并稀釋裂解物，從而降低 RNA 產(chǎn)量。

6. 加入 350 μl 重懸緩沖液。渦旋以wan全重懸沉淀。
     7. 將樣品轉(zhuǎn)移到新的 1.5 ml 微量離心管中。
     8. 加入 300 μL 結(jié)合緩沖液和 20 μL 蛋白酶 K 溶液。渦旋 5 秒鐘以充分混合。

9. 使用振蕩培養(yǎng)箱在 55°C 下孵育 10 分鐘。
    10. 可選：將裂解物通過安裝在注射器上的 20 號針頭（直徑 0.9 mm）至少 5 次，或使用電子組織勻漿器勻漿。此步驟剪切基因組 DNA，降低裂解物的粘度，并提高產(chǎn)量。

11. 將勻漿以 13,000 rpm 離心 3 min。將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
     12. 加入等體積的 100% 異丙醇。渦旋充分混合。
     13. 將最多 700 μl 混合物轉(zhuǎn)移至 2 ml 收集管（提供）中的 RNA 結(jié)合柱中。

14. 以最大速度離心 1 分鐘。
     15. 吸出并丟棄濾液，重復(fù)使用收集管。
     16.重復(fù)步驟 13-15，直到剩余樣品轉(zhuǎn)移到 RNA 結(jié)合柱中。

17. 加入 350 μl 洗滌液 1.
     18. 以最大速度離心 1 分鐘。
     19. 吸出并丟棄濾液，重復(fù)使用收集管。
     20. 對于每個 RNA 結(jié)合柱，準備 DNase I 消化

反應(yīng)混合物如下：

重要說明：
     • DNase I 非常敏感，容易發(fā)生物理變性。不要渦旋 DNase I 混合物。倒置試管輕輕混勻。
     • 在 RNA 分離之前新鮮制備 DNase I 儲備液。
     • 標準 DNase 緩沖液與膜上 DNase I 消化不兼容。使用其他緩沖液可能會影響 RNA 與基質(zhì)的結(jié)合，并可能降低 RNA 產(chǎn)量和純度。

• 所有步驟必須在室溫下進行?？焖俚⌒牡毓ぷ?。

21. 將 50 μl DNase I 消化反應(yīng)混合物直接移液到 RNA 結(jié)合柱的中心表面。

注意：確保將 DNase I 消化混合物直接移液到膜上。如果一些混合物保留在 RNA 結(jié)合柱的壁或 O 形圈上，則 DNase I 消化將不wan全

22. 在室溫下靜置 15 分鐘。
    23. 加入 350 μl 洗滌液 1.以最大速度離心 1 分鐘。
    24. 吸出并丟棄濾液，重復(fù)使用收集管。
    25. 加入 500 μl 洗滌液 2/3。以最大速度離心 1 分鐘。
    26. 吸出并丟棄濾液，重復(fù)使用收集管。
    27. 重復(fù)步驟 25-26 進行第二個洗滌液 2/3 洗滌步驟。

28. 以最大速度離心空的 RNA 結(jié)合柱 2 分鐘，以干燥柱基質(zhì)。

注意：洗脫前干燥柱膜很重要。
殘留的乙醇可能會干擾下游應(yīng)用。

29. 將 RNA 結(jié)合柱轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 微量離心管中。
     30. 將 50-70 μl 不含 RNase 的水直接加入到膜中心（可選：將水預(yù)熱至 70–90°C 將增加 RNA 產(chǎn)量）。在室溫下靜置 1 分鐘。
     31. 以最大速度離心 2 分鐘。

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