諾博萊德 組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑盒

FlashPure Tissue/Cell Genomic DNA Kit動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提qu試劑盒（離心柱型）

目錄號:40017

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑:

  無水乙醇，RNaseA（可選）

保存條件:

  室溫（15~25℃）

  蛋白酶K，室溫可保存6個(gè)月，4℃保存12個(gè)月，- 20℃保存2年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介:

  適用于從動(dòng)物組織、培養(yǎng)細(xì)胞中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA。

  本試劑盒采用獨(dú)te的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等 有毒試劑，也無需進(jìn)行耗時(shí)的醇類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性 雜質(zhì)，得到基因組DNA，無蛋白、核酸酶污染，可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜 交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1.    簡便快速：30 min內(nèi)可獲得高純度的基因組DNA。

2.   安全無毒：無需ben酚/氯仿抽提。

3.   高純：OD260/280=1.7～1.9，長度可達(dá) 30～50 kb，可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng):

1.    如果裂解液TL、結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴 溶解，搖勻后使用。

2.   開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

3.   洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使 用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游 酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

操作步驟:

第一次使用前，請先在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標(biāo)簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。

1.    柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl 平衡液，12,000rpm 離心1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當(dāng)天處理過的柱子）

2.材料處理：

a. 動(dòng)物組織

將動(dòng)物組織在液氮中研磨成細(xì)粉（或者用解剖dao切成小碎塊），取約25mg轉(zhuǎn)入1.5 ml離心管中，加入180μl裂解液TL，再加入20μl蛋白酶K溶液，振蕩至徹di懸浮，56℃水浴1~3小時(shí)，直至組織完quan消化溶解。

推薦樣本投入量：動(dòng)物組織≤25 mg，動(dòng)物脾臟≤10 mg。

鼠尾樣本投入量：大鼠尾巴最大用量為0.6 cm長片段，小鼠鼠尾巴最大用量為1.2cm長片段，并將裂解時(shí)間延長至6-8小時(shí)。

注意：水浴過程中，每10分鐘顛倒混勻一次，可促進(jìn)細(xì)胞裂解。

b.    培養(yǎng)細(xì)胞

① 105~106懸浮細(xì)胞到一個(gè)1.5 ml離心管；對于貼壁細(xì)胞，應(yīng)該先用胰蛋bai酶消化后吹打下來收集。

② 13,000rpm離心10 sec，吸棄上清，留下細(xì)胞團(tuán)和大約10~20μl殘留的液體。

③ 加入200 μl 1× PBS，振蕩至細(xì)胞充分懸浮，洗滌細(xì)胞去除雜質(zhì)，13, 000 rpm離心10sec，完quan吸棄上清。

④再次加入180μl1×PBS，振蕩混勻，使細(xì)胞徹di懸浮。

⑤ 加入20μl蛋白酶K溶液，充分混勻。

3.（可選步驟）加入5μl RNase A (100mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫 放置5 ~ 10min。

4.加入200μl結(jié)合液CB，充分振蕩混勻，70℃水浴或金屬浴處理10 min。

5.冷卻后加100μl無水乙醇(或異丙醇)，充分振蕩混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。

6.    將所得溶液和絮狀沉淀加入一個(gè)DNA吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心1 min，DNA被吸附在膜上，倒棄濾液。

7. 加入500μl抑制物去除IR，13,000rpm離心30sec，倒棄濾液。

8.    加入600μl漂洗液WB（請檢查是否已加入無水乙醇），13,000rpm離心30 sec，倒棄濾液。

9.重復(fù)步驟9一遍。

10.將DNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm離心2min，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

11.取出DNA吸附柱，放入一個(gè)干凈的1.5 ml離心管中，向吸附膜的中央加入100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在80~100℃水浴中預(yù) 熱可以提高產(chǎn)量）， 室溫放置3~5min，13,000rpm離心1min。

12.DNA可以存放在2~8℃，如果要長時(shí)間存放，可以放置在-20℃。

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組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑盒