諾博萊德2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量

2x SYBR Green qPCR Mix（With 100x ROX）

目錄號:71519

產品內容

保存條件

-20℃保存，有效期 24 個月, 使用前充分融解，輕柔顛倒混勻。短期使用可放在 4 ℃，避免反復凍融。

具體產品的參數(shù)以收到產品說明書的參數(shù)為準

產品簡介

2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑，為2x 預混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟，縮短加樣時間，降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴增，可對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結果，具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。

本產品含有獨立包裝參比染料100x ROX（50µmol/µl），用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差，不同儀器所需ROX Reference Dye濃度不同，見下表。

快捷用法:

1. 需要高濃度ROX的機型（終濃度為0.5 µmol/µl）：每1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix加入25µl 100x ROX，充分混勻后，可以直接使用。

2. 需要低濃度ROX的機型（終濃度為0.05 µmol/µl）：每1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix加入2.5µl 100x ROX，充分混勻后，可以直接使用。

操作步驟：

1. 將DNA模板、引物、2 x SYBR Green qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應體系：（以20μl反應體系為例）

注意：

1） 推薦模板加樣量為1-2 μl / 20μl反應體系，cDNA原液≤總反應體系的10%，基因組DNA的量為10 - 100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同，可對模板進行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量。

2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM，就可以得到較好的結果，反應效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內進行調整。擴增效率不高的情況下，可提高引物濃度；發(fā)生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應體系。

3） 舉例為常規(guī)PCR反應體系和反應程序，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的改進和優(yōu)化。
3. qPCR反應程序

注意：

1） 本產品兼容性強，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。建議采用兩步法qPCR反應

程序。一般來說，二步法擴增特異性高，三步法擴增效率高。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴增

或提高退火溫度；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結果時，可嘗試加長延伸時間或者進行三步法PCR擴增。

2） 根據引物的Tm值進行退火&延伸（退火）溫度的設定；

3） 延伸（退火&延伸）時間的設置還需要根據您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據采集時間自行調整。

4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進行設定。

2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量