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| 品牌 | NobleRyder/諾博萊德 | 貨號 | BM6005 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 25T/24S / 50T/48S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 主要用途 | 催化淀粉鏈延長,主要負責(zé)支鏈淀粉的合成 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
可溶性淀粉合成酶（Soluble starch synthase，SSS）試劑盒說明書
分光光度法
可溶性淀粉合成酶試劑盒
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游離態(tài)存在于質(zhì)體基質(zhì)中，催化淀粉鏈延長，主要負責(zé)支鏈淀粉的合成。
測定原理：
SSS 催化ADPG 與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng)，將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時生成ADP，在反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化 NADP+還原為NADPH，NADPH 生成量與前一步反應(yīng)中 ADP 生成量呈正比，340nm 下測定NADPH 增加量即可計算SSS 活性。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BM6005-25T/24S | BM6005-50T/48S | Storage |
提取液：液體 | 30ml | 60ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 25ml | 50ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑四：粉劑 | 1 瓶 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑五：液體 | 1 瓶 | 1 瓶 | -20℃ |
試劑六：粉劑 | 1 瓶 | 1 瓶 | -20℃ |
說明書 | 1 份 | ||
BM6005-25T/24S 試劑二臨用前加入 7ml 試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
BM6005-25T/24S 試劑三臨用前加入 4ml 試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
BM6005-25T/24S 試劑四臨用前加入 9ml 試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
BM6005-25T/24S 試劑五臨用前加入 0.5ml 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
BM6005-25T/24S 試劑六臨用前加入 0.5ml 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
BM6005-50T/48S 試劑二臨用前加入 14ml 試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
BM6005-50T/48S 試劑三臨用前加入 8ml 試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
BM6005-50T/48S 試劑四臨用前加入 17ml 試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
BM6005-50T/48S 試劑五臨用前加入 1ml 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
BM6005-50T/48S 試劑六臨用前加入 1ml 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
自備儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、移液器、1 ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液制備：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、在EP 管中按順序加入下列試劑
試劑名稱（μl） | 測定管 |
樣本 | 150 |
試劑二 | 270 |
試劑三 | 150 |
混勻，30℃保溫 20 min，置沸水浴中 1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻
混勻，30℃保溫 30 min，置沸水浴中 1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻，10000g 4℃離心 10min，取上清液（如果一次性測定樣本較多，可將試劑四、五和六按比例配成混合液）
上清液 | 450 |
試劑四 | 300 |
試劑五 | 15 |
試劑六 | 15 |
混勻后立即 340 nm 波長下記錄初始吸光度A1 和 2min 后的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
注意：試劑二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。
SSS 活性計算：
1、按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
GBSS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T×稀釋倍數(shù)
=529×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計算
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
GBSS 活性（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T×稀釋倍數(shù)
=529×ΔA÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，7.8×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.15 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，2 min；稀釋倍數(shù)：1.9；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量。
可溶性淀粉合成酶試劑盒
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