甜菜堿（Betaine）含量試劑盒說明書

微量法 100T/96S

甜菜堿Betaine含量試劑盒 其他系列

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是生物體內(nèi)dan堿的氧化產(chǎn)物，可以增強免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進動物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。

測定原理：

甜菜堿在強suan條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在 525nm 處有特征吸收峰，測定 525nm 處的吸光值，可計算得樣品的甜菜堿含量。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×3 瓶，4℃保存；臨用前根據(jù)用量配制，每瓶加 20ml 蒸餾水溶解，加 390µl 濃鹽酸調(diào)pH 為 1。

試劑二：99%yi醚，自備。取無水yi醚 59.4ml，加入蒸餾水 0.6ml，混勻。試劑三：70%丙酮，自備。（易揮發(fā)，根據(jù)用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）

自備儀器和用品：

天平、離心機、酶標(biāo)儀、96 孔板、yi醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。

甜菜堿提取：

取烘干后過 40 目篩的樣品約 0.02g，加 0.8ml 水，置于 60℃提取 30min，期間不斷震蕩。再加入 200µl提取液，混勻后 10000g，25℃，離心 10min，取上清液。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 525nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

充分混勻，4℃中反應(yīng) 2h，12000rpm，25℃，離心 10min，棄上清

混勻，12000rpm，25℃，離心 10min，棄上清。置于通風(fēng)櫥使殘余yi醚自然揮發(fā)干凈

震蕩使沉淀充分溶解，取 200µl 于 96 孔板，記錄標(biāo)準(zhǔn)管和測定管 525nm 處吸光值A(chǔ) 測定與 A 空白。

ΔA=A 測定管-A 空白管。

注意事項：

1、試劑一配制時pH 嚴(yán)格控制為 1，否則會導(dǎo)致反應(yīng)不wan全，配制后 4℃只能穩(wěn)定幾個小時，配制后盡快使用。

2、試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護工作。

甜菜堿含量計算公式：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.502x + 0.0057，R2 = 0.9993；x 為甜菜堿濃度（mg/ml），y 為吸光值。

甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷ 0.502× V 標(biāo)準(zhǔn)÷(V 樣÷V 樣總×W) =1.99×（ΔA-0.0057）÷W V 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.3ml；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.3ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g

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