脂肪酶（LPS）活性試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100/96S

脂肪酶LPS活性試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

LPS 又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS 廣泛的存在于各種生物中。血清中 LPS 的異常增高常見(jiàn)于胰腺炎和胰腺癌。

測(cè)定原理：

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算 LPS 活性。

組成：

試劑二：液體 10ml×1 瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩 20min。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 10 μl×1 瓶，10 µmol/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入 3.168 ml 甲苯，充分溶解。

自備儀器和用品：

研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯 80ml、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。

細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 12000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

血清等液體: 直接檢測(cè)。

LPS 測(cè)定操作：

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 710 nm，蒸餾水調(diào)零。

試劑一和試劑二置于 37℃水浴預(yù)熱 30min。

在 1.5ml EP 管中依次加入下列試劑

37℃振蕩反應(yīng) 10 min

37℃振蕩反應(yīng) 10 min 后，8000g，25℃，離心 10min，取上清液

37℃振蕩反應(yīng) 5 min 后，靜置 5min，取 200μl 上層液加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 處測(cè)定吸光值。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

LPS 活性計(jì)算公式：

組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS 活性

按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個(gè)酶活單位。

LPS (μmol/min/mg prot) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)- A 空白管）]×V 反總÷（Cpr×V 樣）

÷T

=16×[(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個(gè)酶活單位。

LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷（W×V 樣÷V樣總）÷T

=16×[(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]÷W

按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義：37℃中每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個(gè)酶活單位。

LPS (μmol /min/104cell) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V 樣總）÷T

=16×[(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]÷細(xì)胞數(shù)量

血清等液體LPS 活性

活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個(gè)酶活單位。

LPS (μmol /min/ml) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷V 樣÷T

=16×[(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]

C 標(biāo)準(zhǔn)品：10 µmol/ml；V 反總：反應(yīng)總體積，0.8ml；V 樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml，需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。

脂肪酶LPS活性試劑盒