果膠酶（pectinase）試劑盒說(shuō)明書

微量法 100T/48S

果膠酶pectinase試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

果膠酶（pectinase）是一類分解果膠質(zhì)酶類的總稱，包括原果膠酶，果膠酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類，廣泛存在于植物果實(shí)和微生物中，主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。

測(cè)定原理：

果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與 DNS 試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在 540nm 有特征吸收峰，測(cè)定 540nm 處吸光值變化可計(jì)算得果膠酶活性。

試劑組成和配制：

試劑二：粉劑×2 瓶，4℃保存；臨用前加入 7.5ml 試劑一，50℃加熱溶解，用不完的試劑 4℃保存一周。

需自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。

酶液提?。?/span>

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g， 4℃離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3、細(xì)胞培養(yǎng)液等：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

50℃水浴溫育 5min

混勻，50℃水浴反應(yīng) 30min

沸水浴 5min，冰浴冷卻終止反應(yīng)，8000g，4℃，離心 10min，蒸餾水調(diào)零，取上清于微量石英比色皿或 96 孔板測(cè)定 540nm 處吸光值A(chǔ)，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

注意事項(xiàng)：

1、試劑二若有沉淀析出，請(qǐng)置于 50℃加熱溶解。

2、測(cè)定之前請(qǐng)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果吸光值較高或較低，請(qǐng)用提取液做適當(dāng)?shù)南♂尰蛘呒哟髽颖玖浚⒃谟?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)或者以實(shí)際加入的樣本體積參與計(jì)算。

煮沸樣本建議在沸水中煮沸 10 分鐘，以將酶che底滅活。

酶活性計(jì)算公式：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/ml；y 為吸光值。

按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在 50℃，pH3.5 條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

果膠酶活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在 50℃，pH3.5 條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

果膠酶活性（mg/h /g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：在 50℃，pH3.5 條件下，每 104 細(xì)胞每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

果膠酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量

細(xì)胞培養(yǎng)液

酶活性定義：在 50℃，pH3.5 條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

果膠酶活性（mg/h /ml）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷V 樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)

V 反總：反應(yīng)總體積，0.15ml；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.9821x - 0.008，R2 = 0.9996；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/ml；y 為吸光值。

按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在 50℃，pH3.5 條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠產(chǎn)。生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

果膠酶活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在 50℃，pH3.5 條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

果膠酶活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷W

按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：在 50℃，pH3.5 條件下，每 104 細(xì)胞每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

果膠酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量

細(xì)胞培養(yǎng)液

酶活性定義：在 50℃，pH3.5 條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

果膠酶活性（mg/h/ml）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反總÷V 樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)

V 反總：反應(yīng)總體積，0.15ml；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h

果膠酶pectinase試劑盒