FDA 水解酶（Fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

FDA 水解酶試劑盒 土壤系列

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

FDA 水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。

測定原理：

FDA 是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在 490nm 處有強吸收峰，通過檢測 490nm 處的吸光值變化可計算得 FDA 水解酶活性。

試劑組成和配制：

試劑二：粉劑 1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 4ml 試劑三溶解。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋

樣本處理：

稱取風(fēng)干過 30-50 目篩土壤約 0.1g，備用。

測定操作表：

充分混勻，30℃，震蕩 1h

10000g，25℃，離心 5min，取 200μl 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測定 490nm 處吸光值A(chǔ)，△A1=A標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管，△A2=A 測定管-A 對照管。注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

酶活性計算公式：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位。

FDA 活性（μmol/d/g）=（△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷W

= 0.96×（△A2÷△A1）÷W

用 96 孔板測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位。

FDA 活性（μmol/d/g）=（△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷W

= 0.96×（△A2÷△A1）÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度 100μmol/L；V 反總：反應(yīng)總體積，0.4ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項:

1、盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。

2、測定之前進(jìn)行預(yù)實驗，若吸光值較高，請進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

FDA 水解酶試劑盒 土壤系列